BetVictor Sports(伟德体育)国际官网骨髓间充质干细胞对兔实验性自体免疫性葡萄膜炎的作用

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　　结果：（1）通过裂隙灯显微镜观察和比较，EAU组大鼠出现明显眼前段炎症反应，在建模后第11~17天，hUMSCs-S治疗有降低眼前段Caspi评分的作用（P0.05）；（2）眼球组织切片HE染色结果显示，建模后第14天，hUMSCs-S组大鼠虹膜睫状体和视网膜结构破坏及前房炎细胞浸润数量均低于EAU组（P0.05）；（3）眼球组织切片免疫组化及免疫荧光染色结果显示，hUMSCs-S组大鼠虹膜睫状体、前房和视网膜中CD3+ T细胞浸润较EAU组减少，视网膜及视网膜色素上皮（RPE）层ZO-1表达量较EAU组增加；（4）ELISA法检测大鼠外周血血清IL-17及IL-10浓度结果显示，与EAU组相比，hUMSCs-S组大鼠外周血IL-17表达下降、IL-10表达增加（P0.05）。

　　这种技术主要包括以下步骤：（1） MSCs培养和处理： MSCs在完全培养基下培养，处理方式因实验目的而异；（2）细胞固定：使用4%的聚甲醛对细胞进行固定处理，可以利用甲醛代替，但固定剂不能是乙醛，以免影响细胞膜的完整性；（3）细胞膜透性处理：使用0.1%的Triton X-100或其他细胞膜透性处理剂，使得抗体可以渗透到细胞内部，增强免疫荧光信号；（4）免疫反应和荧光标记：使用特异性抗体针对MSCs的表面标记，如CD105、CD73和CD90等，或染色体水平的标记，如Oct4或Nanog等，进行免疫反应，并用荧光标记二抗进行信号检测；（5）显微镜观察和成像：使用激光共聚焦显微镜或荧光显微镜等，观察MSCs标记的荧光信号，并进行成像和分析。

　　大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）的分离与鉴定大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）的分离与鉴定材料试剂(一)主要设备和产地1.手术器械上海手术器械厂2.台式水平离心机Eppendorf，5810R德国3.Nanopure超纯水仪日本SANYO公司4.AA一200型电子天平美国Denver Instrumol/Lent公司5.低温高速离心机ThermoForma公司6.90一2型磁力搅拌器上海沪西分析仪器厂7.电动匀速垂直转轮上海沪西分析仪器厂8.微量移液枪德国Eppendorf公司9.烧杯、容量瓶上海实生公司10.全自动酶标光度仪美国Bio-Rad公司11.6cm/10cm细胞培养皿美国Conring12.2mL冻存管、细胞冷冻储存器美国Conring13.低温高速离心机ThermoForma公司产品14.YJ-875超净工作台苏州工业园区三兴净化科技有限公司15.C02培养箱3111型美国Thermo Forma公司16.CK40-F200型倒置显微镜日本Olympus公司17.10ml注射器美国BD公司(二)试剂和材料1.谷氨酰胺(L-Glutamine)美国Hyclone公司2.75%消毒酒精上海生工3.肝素美国sigma公司4.胰蛋白酶美国Amresco公司5.胎牛血清美国Gibco公司6.α-MEM培养液美国Hyclone公司7.5-6周龄SD大鼠上海斯莱克实验动物有限公司8.Percoll细胞分离液美国GE公司9.DMSO(细胞培养级)美国Sigma公司Rat BMSC的分离与培养分离颈椎脱臼法处死大鼠，75%酒精中浸泡5分钟，超级工作台内依次取下大鼠两条胫骨及两条股骨。

　　2006年，我国在胎盘和脐带组织中分离出间充质干细胞，这种组织来源的间充质干细胞不仅保持了间充质干 细胞的生物学特性，而且还具备如下优点：①胎盘和脐带中的干/祖细胞更原始，有更强的增殖分化能力。②免疫 细胞较为幼稚，功能活性低，不会触发免疫反应及引起移植物抗宿主病。③干细胞易于分离，纯度高，无肿瘤细 胞污染。④扩增时培养体系能统一，便于质控。⑤可制成种子细胞冷冻，多次使用，冷冻后细胞损失小。⑥潜伏 性病毒和病原微生物的感染及传播几率比较低。⑦采集时对产妇及新生儿无任何危害及损伤。⑧采集方便，易于 保存和运输，伦理学争议少。这种胎盘和脐带来源的间充质干细胞有可能成为骨髓间充质干细胞的理想替代物， 并具有更大的应用潜能。